1986 yılında geliştirilmiş olan pcr * yöntemi dna moleküllerindeki özel dizilerin (istenilen gen olabilir) canlı hücre içerisine sokulmadan izole edilip çoğaltılmasını sağlar.genomdan seçilen bir bölgenin milyonlarca kopyası bu yöntemle sağlanabilir.
pcr yönteminde her reaksiyon üç temel aşamadan oluşur:
1- dna'nın denaturasyon u
2- primer dizilerin dna nın tek zincirlerine bağlanması
3- dna polimeraz tarafından zincir uzatma reaksiyonu
PCR-Polimeraz Zincir Reaksiyonu-Polymerase Chain Reaction
dizisi bilinen iki DNA segmenti arasindaki DNA fragmentinin enzimatik yollarla binlerce kopyasının elde edilmesi olayidir.olay cesitli asamalardan olusmaktadir.sonucta arastirmak istedigimiz DNA parcasinin binlerce kopyasini elde etmis oluruz.
Dr. Kary B. Mullis in 1980 li yıllarda yaptığı PCR çalışmaları ile 1993 yılında Kimya alanında Nobel ödülü almıştır.
deneysel araştırmanın bir kısmında bazen günde 3 kere yapılmak zorunda kalınan,uzun uzun bekleten, mutasyonlara yol açması sebebiyle karın ağrısı yaratabilen sonuç olarak insanda sempatik olmayan hisler uyandıran ve lakin moleküler biyoloji dediğimiz bilimin temel taşı olan kimyasal reaksiyon.
in vitro ortamda hedef nükleik asidin çoğaltılması, özgün DNA dizilerinin geometrik amplifikasyonu ile sonuçlanan tekrarlamalı bir işlemdir. PCR, nükleik asit baz sırasının özgül hedeflerini yeterince çoğaltmak için tuzlar, ısı, nükleotitler, oligonükleotit primerleri ve polimeraz içerir. Bu teknikle birkaç saat içinde 1 DNA molekülünden bir milyar DNA molekülü kopyası elde edilebilir.
polymerase chain reaction
kary mullis tarafından bulunmuş ve mullis'e nobel ödülünü getirmiş olan dna kopyalama tekniğidir.üç temel aşamadan oluşur:
denaturasyon, dna zincirlerinin ayrılması
annealing, primerlerin uygun dna bölgesine bağlanması
sentez, Taq polimeraz enziminin yeni zinciri sentezlemesi
bunun bir de gerçek zamanlı olanı vardır. Normal pcr'ın aksine elde edilen ürünü her döngüde anında takip edebilmenize yardımcı olur. Daha küçük DNA'ları çoğaltabilme özellliğine sahiptir.
önce tüpe DNA'yı çoğaltacağımız sekansın problarını ve polimeraz enzimlerini koyarsın. ısıyı 92 dereceye çıkartıp DNA zincirlerini ayırırsın. ikinci aşamada 50 dereceye düşürüp probların baglanmasını sağlarsın. üçüncü aşamada 70 dereceye çıkarıp ısıya dayanıklı polimerazlarla iki zincirden de bir DNA çoğaltırsın. Bunu 20 30 kez yapinca milyonlarca DNA'n olur.
--spoiler--
There was a time when to amplify DNA,
You had to grow tons and tons of tiny cells.Then along came a guy named Dr. Kary Mullis,
Said you can amplify in vitro just as well.Just mix your template with a buffer and some primers,
Nucleotides and polymerases, too.
Denaturing, annealing, and extending.
Well it s amazing what heating and cooling and heating will do.
PCR, when you need to detect mutations.
PCR, when you need to recombine.
PCR, when you need to find out who the daddy is.
PCR, when you need to solve a crime.
--spoiler--
Normal protokolunun yaninda gradient pcr, quantative pcr, real time pcr gibi turlerinin de bulundugu bir molekuler biyoloji teknigidir. Cogu labda sikca uygulanir.
Benim de 2 haftadir gradientiyle hasir nesir oldugumdur. Normalde protein calisan biriyim fakat sartlar beni mutasyon yapmaya itti. Cikmiyor istedigim sonuc. Cildiricigimm.
